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（来源：医学界）
转自：医学界
人表皮生长因子受体2（HER2）与乳腺癌患者的强侵袭性肿瘤相关，常导致不良预后。因此，HER2阳性状态的诊断及其靶向治疗对乳腺癌患者至关重要。免疫组织化学（IHC）和荧光原位杂交（FISH）是临床诊断乳腺癌HER2状态的传统方法。近年来随着分子诊断技术的进步，定量实时逆转录PCR（RT-qPCR）等新技术已通过系列评估验证，或可对传统诊断方法形成有效补充。一篇综述详细探讨了以RT-qPCR为代表的分子诊断技术进展，旨在助力深入理解分子机制以开发先进分子工具[1]。本文特此整理关键内容，以飨读者。
当前HER2诊断策略
HER2基因扩增伴随mRNA及蛋白表达水平的升高。其变异可从DNA、RNA或蛋白层面进行评估。基于既往曲妥珠单抗疗效研究数据，美国食品药品监督管理局已批准采用IHC和FISH检测乳腺癌HER2状态。IHC通过抗体检测HER2蛋白表达水平，FISH则利用DNA探针通过荧光检测系统计算HER2基因拷贝数。其他检测方法包括酶联免疫吸附试验、微阵列、测序、RT-qPCR以及循环肿瘤细胞HER2检测等（表1）。
表1 当前HER2阳性乳腺癌检测方法
HER2检测技术面临的挑战
上述分子检测技术已全球广泛应用于临床检测HER2的DNA、RNA及蛋白水平。基于RT-PCR的基因表达定量是HER2检测的重要方法，可为临床样本回顾性分析提供价值。但RT-qPCR技术存在特定挑战：福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织中的RNA易降解，且内参基因的选择会显著影响结果准确性。
RT-qPCR诊断技术最新研究进展
多项研究已评估RT-qPCR在乳腺癌分子分型及HER2过表达检测中的应用潜力。
Park等[2]评估了RT-qPCR作为IHC和FISH辅助检测方案的潜力。后者虽现行通用，但耗时长、成本高且对灵敏度与准确性要求严苛。研究对两年内收集的乳腺癌组织样本进行分析显示，RT-qPCR与IHC/FISH相比特异性达89.8%，敏感性为93%。表明HER2基因mRNA定量可作为传统IHC/FISH检测的替代方案。
Wang等[3]开发了巢式RT-qPCR法检测临床样本中HER2 mRNA过表达。结果显示，经IHC/FISH预先鉴定的患者样本中，该方法的真阳性率为92%，假阳性率为2%。RT-qPCR与FISH、IHC的一致性分别达到92.1%和87.2%。该方法被证实在HER2检测中可靠，有助于优化HER2阳性乳腺癌患者的曲妥珠单抗治疗。
Liable等（2016年）[4]对MammaTyper试剂盒进行系列分析评估。该体外诊断试剂盒通过RT-qPCR检测乳腺癌亚型mRNA表达，以解决IHC分型不一致性问题，并且可同步检测MKI67、PGR、ESR1及HER2表达。综合分析显示，该检测在33.5个定量循环内呈线性，两种平台间变异极小；单标志物检测一致性超过94%；且RNA提取流程的变化不影响结果。研究表明MammaTyper能通过分析扰动实现验证，标志物检测变异极小，可作为基于分子分析的乳腺癌分型先进工具。
EL Hadi等[5]评估了7个基因作为内参基因在乳腺癌FFPE组织HER2基因mRNA标准化中的适用性，并进行RT-qPCR与IHC/FISH的一致性分析。研究中先检测乳腺癌细胞系HER2表达，再评估7个基因作为RT-qPCR内参的潜力，最终证实RT-qPCR可作为有效的辅助检测手段指导乳腺癌治疗与管理。
Wang等（2017年）[6]采用RT-qPCR技术分析FFPE组织样本中HER2基因表达，使用3种不同内参基因进行相对定量分析。结果显示：与IHC相比灵敏度达96.7%，与FISH相比为92.4%；进一步发现HER2过表达与分子亚型、PR状态、ER状态、组织学类型及TNM分期显著相关。表明RT-qPCR可作为HER2 mRNA过表达筛查的辅助工具。
Zoppoli等[7]比较了IHC、FISH、qPCR与RT-qPCR在乳腺癌HER2状态检测中的效能，并对不一致病例通过Western blot直接检测HER2蛋白水平。FISH与qPCR总体一致率为94.1%，RT-qPCR与FISH为90.81%。值得注意的是，HER2蛋白分析与RT-qPCR的相关性高于FISH，表明在HER2蛋白过表达患者中，RT-qPCR检测效能优于FISH。
小结
分子诊断技术的不断创新为HER2阳性乳腺癌的精准诊疗体系奠定了坚实基础。当前研究表明，以RT-qPCR为代表的分子检测技术有望提升HER2状态判读的灵敏性与特异性，还有效弥补了传统IHC/FISH方法在标准化程度和操作效率方面的局限性。未来，通过整合多组学数据与人工智能分析框架，新一代分子诊断技术有望进一步推动HER2阳性乳腺癌的个体化治疗策略优化。
参考文献：
[1]Albanyahyati B, et al. Advances in Molecular Diagnostics and Targeted Therapeutic Approaches in HER-2 Positive Breast Cancer. Asian Pac J Cancer Prev. 2025;26(7):2277-2289. Published 2025 Jul 1.
[2]Park S, et al. Quantitative RT-PCR assay of HER2 mRNA expression in formalin-fixed and paraffin-embedded breast cancer tissues. Int J Clin Exp Pathol. 2014;7:6752–9.
[3]Wang HY, et al. Evaluation of a quantitative RT-PCR assay to detect HER2 mRNA overexpression for diagnosis and selection of trastuzumab therapy in breast cancer tissue samples. Exp Mol Pathol. 2014;97:368–74.
[4]Laible M, et al. Technical validation of an RT-qPCR in vitro diagnostic test system for the determination of breast cancer molecular subtypes by quantification of ERBB2, ESR1, PGR and MKI67 mRNA levels from formalin-fixed paraffin-embedded breast tumor specimens. BMC Cancer. 2016;16:398.
[5]El Hadi H, et al. Development and evaluation of a novel RT-qPCR based test for the quantification of HER2 gene expression in breast cancer. Gene. 2017;605:114–22.
[6]Wang H-Y, et al. Clinical Usefulness of a One-Tube Nested Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction Assay for Evaluating Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 mRNA Overexpression in Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Breast Cancer Tissue Samples. Pathobiol J Immunopathol Mol Cell Biol. 2017;84:57–70.
[7]Zoppoli G, et al. Her2 assessment using quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction reliably identifies Her2 overexpression without amplification in breast cancer cases. J Transl Med. 2017;15:91.
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审批编号：CN-172266过期日期：2026-11-19
